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技術(shù)文章

eppendorf艾本德5702R臺(tái)式冷凍微量離心機(jī)使用案例介紹

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艾本德 Eppendorf 5702 R 是一款非常經(jīng)典和可靠的冷凍型微量臺(tái)式高速離心機(jī)。它在分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、生物化學(xué)等實(shí)驗(yàn)室中應(yīng)用極為廣泛。以下將通過幾個(gè)典型的使用案例來詳細(xì)介紹其操作流程、關(guān)鍵技巧和注意事項(xiàng),幫助您更直觀地掌握其應(yīng)用。


一、艾本德5702R冷凍離心機(jī)乙醇沉淀后DNA/RNA的回收(常用場景)

1、準(zhǔn)備工作:

將需要離心的 1.5 mL 或 2.0 mL 微量離心管(內(nèi)含核酸與醇的混合液)在室溫平衡片刻,以減少溫差。

確保離心機(jī)已接通電源,制冷系統(tǒng)已開啟(建議提前15分鐘開機(jī)預(yù)冷)。

準(zhǔn)備適配的轉(zhuǎn)子:例如 FA-45-30-11 轉(zhuǎn)子(用于 2.0/1.5 mL 管,MAX 15,000 rpm)。

2、操作流程:

打開蓋子: 按下正面按鈕打開離心機(jī)門。

(1)放置轉(zhuǎn)子與平衡:

檢查轉(zhuǎn)子是否已穩(wěn)妥安裝在電機(jī)軸上。

嚴(yán)格進(jìn)行配平! 將含有樣品的管子對稱放置。如果樣品數(shù)是單數(shù),必須用一管裝有等體積水或緩沖液的管子作為平衡管。

確保所有管蓋蓋緊,并且管蓋方向一致(建議管蓋朝外朝向轉(zhuǎn)子中心,以免高速旋轉(zhuǎn)時(shí)蓋子意外彈開)。

(2)參數(shù)設(shè)置:

關(guān)閉機(jī)蓋。

在控制面板上設(shè)置:

溫度: +4°C。低溫有助于沉淀,并防止核酸降解(尤其是RNA)。

轉(zhuǎn)速/離心力: ≥ 12,000 rpm 或 ≥ 12,000 xg。

時(shí)間: 15-30分鐘。

按下 “Start" 鍵。儀器會(huì)先加速至設(shè)定轉(zhuǎn)速,并保持溫度。

(3)運(yùn)行結(jié)束

運(yùn)行結(jié)束后會(huì)發(fā)出蜂鳴聲,轉(zhuǎn)子緩慢停止。

等待轉(zhuǎn)子停止后,再按下開門鍵打開機(jī)蓋。

小心取出樣品管,輕輕倒掉上清(管底的白色沉淀即為核酸沉淀)。

進(jìn)行后續(xù)的70%乙醇洗滌和干燥步驟。


二、艾本德5702R冷凍離心機(jī)快速收集細(xì)胞或細(xì)菌沉淀

實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?將液體培養(yǎng)基中的哺乳動(dòng)物細(xì)胞或細(xì)菌通過離心快速收集到管底。

1、準(zhǔn)備工作:

樣品為裝有細(xì)胞懸液的 1.5 mL 離心管。

轉(zhuǎn)子同上。

2、操作流程:

平衡并裝載樣品管。

參數(shù)設(shè)置:

溫度: +4°C(保持細(xì)胞活性,防止蛋白降解)或 室溫(對于細(xì)菌)。

轉(zhuǎn)速/離心力: 根據(jù)樣本類型設(shè)定。

真核細(xì)胞: 通常 300 - 500 xg, 5-10分鐘。避免高速破壞細(xì)胞。

大腸桿菌等細(xì)菌: 8,000 - 12,000 xg, 1-2分鐘。

啟動(dòng)離心。

結(jié)束后,可見管底有清晰的細(xì)胞/細(xì)菌沉淀塊,小心吸棄上清。


三、艾本德5702R冷凍離心機(jī)小體積樣品的“瞬離"

實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?將PCR管壁或管蓋上的液體甩至管底,或使反應(yīng)體系混合均勻。

1、準(zhǔn)備工作:

使用 PCR 條管或單個(gè) 0.2 mL PCR 管。

更換適配的轉(zhuǎn)子:例如 A-2-DWP 轉(zhuǎn)子(用于 PCR 排管)或帶有適配器的轉(zhuǎn)子。

2、操作流程:

將PCR管放入適配器中并對稱平衡。

參數(shù)設(shè)置:

溫度: 通常設(shè)為 室溫 或直接使用 “Short Spin" 功能(瞬離按鈕)。

轉(zhuǎn)速/離心力: 6,000 - 10,000 rpm。

時(shí)間: 10 - 30秒。時(shí)間極短,因此無需開啟制冷(制冷系統(tǒng)來不及響應(yīng))。

按下“Start"鍵,瞬間完成。

立即取出使用。


四、艾本德5702R冷凍離心機(jī)在不同溫度下進(jìn)行蛋白沉淀

實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?使用TCA/丙酮等方法沉淀蛋白質(zhì)。

1、準(zhǔn)備工作:

樣品為蛋白溶液與沉淀劑的混合液。

根據(jù)實(shí)驗(yàn)方案要求,可能需要室溫或低溫沉淀。

2、操作流程:

裝載并平衡樣品。

參數(shù)設(shè)置:

方案一(低溫沉淀): 溫度設(shè)為 +4°C, 轉(zhuǎn)速 14,000 - 15,000 xg, 時(shí)間 15-20分鐘。可提高沉淀效率,減少蛋白降解。

方案二(室溫沉淀): 溫度設(shè)為 +20°C 或關(guān)閉制冷,其他參數(shù)類似。

結(jié)束后,小心移除上清,收集蛋白沉淀。


總結(jié): Eppendorf 5702 R是一款精密儀器,其核心在于 “平衡、合適的轉(zhuǎn)子、正確的溫控和離心參數(shù)" 。通過上述案例,您可以看到它在幾乎所有涉及微量樣品處理的實(shí)驗(yàn)步驟中都是工具。養(yǎng)成良好的操作習(xí)慣,能極大延長儀器壽命并保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的重復(fù)性。

TEL:18016231680

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