伯樂S1000™梯度PCR儀是一款經(jīng)典且性能穩(wěn)定的儀器。其操作核心在于理解其物理旋鈕和顯示屏的交互方式，與現(xiàn)代全觸屏PCR儀有所不同。以下為您提供詳細(xì)的操作步驟、關(guān)鍵注意事項和實用技巧。

一、伯樂S1000梯度PCR儀操作前準(zhǔn)備

1、儀器檢查：

確認(rèn)電源線連接牢固，電源開關(guān)位于“OFF"狀態(tài)（位于儀器背面）。

打開儀器頂蓋，檢查樣品槽是否干凈，無碎屑或殘留物。

2、編寫程序：

在電腦或?qū)嶒炗涗洷旧项A(yù)先寫好完整的PCR程序，包括：

預(yù)變性（通常94-95℃， 2-5分鐘）

循環(huán)階段（變性、退火、延伸的溫度和時間，循環(huán)次數(shù)）

梯度退火溫度（如果需要）：確定梯度范圍和實驗組數(shù)（S1000的梯度塊是橫向的，共12列）。

最終延伸（通常72℃， 5-10分鐘）

保溫（通常4℃或10℃， ∞）

3、樣品準(zhǔn)備：

在冰上配制PCR反應(yīng)體系，并分裝到0.2ml的薄壁PCR管中。

蓋緊管蓋，防止加熱過程中液體蒸發(fā)和凝結(jié)。

短暫離心收集液體至管底。

二、伯樂S1000梯度PCR儀操作步驟

1、開機(jī)與放置樣品

（1）接通電源，打開儀器背面的主電源開關(guān)。

（2）按下儀器正面左下角的銀色按鈕，打開頂蓋。

（3）將裝有樣品的PCR管垂直、緊密地放入熱槽中。如果樣品數(shù)少，盡量對稱放置以獲得均勻的熱效應(yīng)。

（4）務(wù)必蓋緊頂蓋。

2、創(chuàng)建或調(diào)用程序

（1）按 RUN/ENTER 鍵進(jìn)入主菜單。

（2）旋轉(zhuǎn)旋鈕，使屏幕光標(biāo)選擇 “PROG"（程序）。

（3）按 RUN/ENTER 確認(rèn)。

新建程序：旋轉(zhuǎn)旋鈕選擇 “NEW"，按 RUN/ENTER。

調(diào)用舊程序：旋轉(zhuǎn)旋鈕選擇已存儲的程序號（1-9），按 RUN/ENTER。

3、設(shè)置程序參數(shù)

（1）屏幕顯示 “STEP 1"。旋轉(zhuǎn)旋鈕設(shè)置溫度，按 RUN/ENTER 確認(rèn)。

（2）旋轉(zhuǎn)旋鈕設(shè)置時間（分鐘:秒），按 RUN/ENTER 確認(rèn)。儀器會自動進(jìn)入 “STEP 2"。

（3）重復(fù)以上步驟，設(shè)置所有循環(huán)步驟（變性、退火、延伸）。對于循環(huán)內(nèi)的步驟，系統(tǒng)會提示您設(shè)置循環(huán)次數(shù)。

（4）設(shè)置最后的保溫步驟（通常設(shè)為4℃）。時間可設(shè)為“∞"或一個較長的時間。

4、設(shè)置梯度（關(guān)鍵步驟）

（1）在設(shè)置退火步驟的溫度時，按 GRAD 鍵，屏幕會顯示梯度設(shè)置界面。

（2）設(shè)置上限溫度：屏幕通常先指示“Grad Top"。旋轉(zhuǎn)旋鈕設(shè)置梯度一側(cè)的MAX溫度，按 RUN/ENTER 確認(rèn)。

（3）設(shè)置下限溫度：屏幕指示變?yōu)椤癎rad Bot"。旋轉(zhuǎn)旋鈕設(shè)置梯度另一側(cè)的低溫度，按 RUN/ENTER 確認(rèn)。

（4）重要：儀器會自動在左右兩端的樣品列之間生成一個線性的溫度梯度。中間各列的溫度是自動計算生成的。請將您的樣品按照實驗設(shè)計放入對應(yīng)的列中。

（5）再次按 GRAD 鍵退出梯度設(shè)置模式，繼續(xù)設(shè)置該退火步驟的時間。

5、保存與運(yùn)行程序

（1）所有步驟設(shè)置完畢后，按 RUN/ENTER。

（2）旋轉(zhuǎn)旋鈕選擇 “SAVE"，按 RUN/ENTER。

（3）旋轉(zhuǎn)旋鈕為程序選擇一個編號（1-9），按 RUN/ENTER 保存。

（4）返回主界面或程序就緒界面后，按下 START/STOP 鍵，儀器開始運(yùn)行。您會聽到蜂鳴器提示，并看到狀態(tài)變?yōu)椤癛UN"。

6、運(yùn)行結(jié)束

（1）程序完成后，蜂鳴器會響起，狀態(tài)顯示為“IDLE"（空閑）并停留在最終保溫溫度。

（2）按 START/STOP 鍵可以停止蜂鳴。

（3）打開頂蓋，盡快取出樣品進(jìn)行后續(xù)分析或置于冰上。

三、關(guān)鍵注意事項

1、梯度方向：伯樂S1000的梯度是橫向的（從左到右）。請確保您清楚知道從左到右每一列對應(yīng)的實際溫度，并在放置樣品管和記錄時對應(yīng)好。

2、管蓋緊閉：這是防止蒸發(fā)和污染的最重要步驟。

3、熱蓋溫度：S1000的熱蓋溫度通常是固定的（~105℃），用于防止管蓋內(nèi)冷凝，無需手動設(shè)置。確保熱蓋清潔且與管蓋接觸良好。

4、程序驗證：在按START前，務(wù)必通過旋鈕瀏覽一遍已設(shè)置的程序，確認(rèn)所有溫度、時間和梯度設(shè)置無誤。

5、緊急停止：運(yùn)行過程中如需停止，直接按 START/STOP 鍵，儀器會停止加熱并進(jìn)入空閑狀態(tài)。

四、常見問題

1、屏幕不亮/無反應(yīng)：檢查背面的主電源開關(guān)和電源線是否接通。

2、溫度不穩(wěn)定或報錯：可能是儀器需要校準(zhǔn)或存在硬件故障，請叫維修工程師。

3、梯度效果不理想：檢查樣品管是否對稱放置、體積是否一致、熱蓋是否蓋緊。

建議：使用時，強(qiáng)烈建議用水或模擬反應(yīng)體系進(jìn)行一次全流程操作演練，并記錄下梯度各列的實際溫度（可用熱電偶溫度計測量），以熟悉流程和驗證儀器狀態(tài)。