賽默飛世爾科技（Thermo Fisher Scientific）的 ProFlex? 3x32 PCR 系統(tǒng) 是一款高度靈活、可配置的梯度PCR儀（支持三個獨立溫區(qū)，每個溫區(qū)可放置不同的模塊，如標準96孔、快速96孔、雙槽384孔等）。根據(jù)您的實驗需求，運行該系統(tǒng)通常需要以下耗材和試劑：

一、賽默飛ProFlex 3x32PCR系統(tǒng)核心耗材

1、PCR板或管：

（1）與模塊匹配的耗材至關(guān)重要。系統(tǒng)支持多種模塊，請根據(jù)您使用的模塊類型選擇：

96孔模塊：使用標準的 0.2ml 8聯(lián)排管（PCR條管） 或 96孔PCR板。

384孔模塊：使用專用的 384孔PCR板。

（2）材質(zhì)：推薦使用高質(zhì)量、薄壁、光學(xué)透明的聚丙烯材質(zhì)，以確保熱傳導(dǎo)和熒光檢測兼容性（如果后續(xù)需要進行qPCR，但ProFlex本身是普通PCR儀）。

2、封蓋材料：

（1）對于PCR板：

光學(xué)透明封板膜：密封性好，兼容后續(xù)的熒光檢測（如在其他儀器上做qPCR分析）。

熱封膜：使用熱封儀密封，是防止蒸發(fā)和交叉污染可靠的方式之一。

壓敏型封板膜（可撕式）：使用方便，但需確保按壓緊密。

（2）對于8聯(lián)排管：

平蓋或凸蓋：根據(jù)PCR儀熱蓋類型選擇。ProFlex使用自動壓力熱蓋，能適應(yīng)不同高度的管蓋，但需確保所有管蓋高度基本一致。

管蓋通常隨管一起購買。

二、賽默飛ProFlex 3x32梯度PCR系統(tǒng)核心試劑

1、PCR主反應(yīng)混合物：

（1）預(yù)混液：推薦使用 Taq DNA聚合酶預(yù)混反應(yīng)液（2× PCR Master Mix），其中已包含Taq酶、dNTPs、MgCl?、反應(yīng)緩沖液等。使用方便，重復(fù)性好。例如，賽默飛的 TaqMan® Fast Advanced Master Mix（用于探針法qPCR的預(yù)混液，也可用于普通PCR）或 Platinum™ Taq DNA Polymerase 系列。

（2）或自行配制：需要單獨購買：

耐熱DNA聚合酶（如Taq酶）

10× PCR反應(yīng)緩沖液

氯化鎂

dNTP混合物

2、模板DNA：您要擴增的目標DNA，濃度和純度需合適。

3、引物：針對目標序列特異設(shè)計的上游和下游引物，通常以干粉或儲存液形式提供，使用時稀釋到工作濃度。

4、無核酸酶水：用于補足反應(yīng)體積，并稀釋模板和引物。務(wù)必使用無核酸酶的水或TE緩沖液，以避免DNA降解。

三、可選/輔助試劑與耗材

1、陽性對照：含有已知目標序列的DNA模板，用于驗證PCR體系是否正常工作。

2、陰性對照：

（1）無模板對照：用無核酸酶水代替模板DNA，用于檢測試劑或環(huán)境是否存在DNA污染。

（2）無引物對照：用等體積水代替引物，用于檢測模板是否有殘留雜質(zhì)。

3、染料（用于普通PCR終點檢測）：

（1）上樣染料：如果PCR產(chǎn)物后續(xù)需要進行瓊脂糖凝膠電泳，可在反應(yīng)完成后加入或在配制預(yù)混液時加入。

（2）在凝膠電泳中顯影的染料：如溴化乙錠、SYBR® Safe等更安全的替代品。

4、用于梯度PCR優(yōu)化的試劑：當您使用梯度功能尋找退火溫度時，可能需要準備多管/多孔的相同反應(yīng)體系，以便在不同溫度下同時測試。

四、重要操作提示：

1、模塊與耗材匹配：在開機前，務(wù)必確認儀器中安裝的模塊類型（可從儀器觸摸屏的“模塊設(shè)置"中查看），并選擇與匹配的耗材。錯誤的耗材會導(dǎo)致熱蓋壓力不均、熱傳導(dǎo)不佳甚至損壞儀器。

2、建立和保存程序：充分利用ProFlex的三區(qū)獨立梯度功能。您可以為每個區(qū)設(shè)置獨立的溫度程序，包括在退火步驟設(shè)置溫度梯度（例如，A區(qū)設(shè)置為58°C，B區(qū)為60°C，C區(qū)為62°C；或每個區(qū)內(nèi)也可設(shè)置梯度）。程序可以在觸摸屏上輕松創(chuàng)建和保存。

3、防止污染：操作時務(wù)必佩戴手套，并在專門的超凈工作臺或干凈區(qū)域配制反應(yīng)體系，與加模板DNA的區(qū)域分開。

4、體系體積：確保反應(yīng)體系體積在推薦范圍內(nèi)（通常20-50μl），并遵循PCR板/管的體積要求。

總結(jié)清單：您每次實驗前需要準備的是：

匹配模塊的PCR板/管 + 密封膜/蓋 + PCR預(yù)混液 + 模板DNA + 引物 + 無核酸酶水 + 對照品 + 移液用品。