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伯樂(lè)CFX DUET是一款非常精密的光學(xué)檢測(cè)儀器,為了確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性、穩(wěn)定性和可重復(fù)性,在工作中必須遠(yuǎn)離一些可能對(duì)其產(chǎn)生干擾的儀器。核心原則是:避免電磁干擾、振動(dòng)干擾和氣溶膠污染。以下是需要遠(yuǎn)離的儀器類(lèi)別和具體說(shuō)明:
一、伯樂(lè)CFX DUET實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀產(chǎn)生強(qiáng)烈電磁干擾的儀器
這類(lèi)儀器是qPCR儀的“頭號(hào)天敵",因?yàn)樗鼈儠?huì)嚴(yán)重干擾qPCR儀內(nèi)部精密的電路、信號(hào)傳輸和探測(cè)器工作,導(dǎo)致信號(hào)不穩(wěn)定、數(shù)據(jù)跳動(dòng)(曲線(xiàn)毛刺多)甚至儀器故障。1
1、離心機(jī):
(1)危害: 尤其是高速離心機(jī)和超速離心機(jī)在啟動(dòng)、加速和停止時(shí)會(huì)產(chǎn)生巨大的瞬時(shí)電流和電磁場(chǎng)。
(2)建議: 不要與qPCR儀共用同一個(gè)電路插座或排插。 將離心機(jī)放置在遠(yuǎn)離qPCR儀的另外一個(gè)實(shí)驗(yàn)臺(tái)或房間。如果必須在同一房間,保持至少2-3米的距離,并確保電源分開(kāi)。
2、大功率微波爐/電磁爐:
(1)危害: 工作原理就是強(qiáng)大的電磁場(chǎng),干擾性強(qiáng)。
(2)建議: 實(shí)驗(yàn)室嚴(yán)禁放置此類(lèi)設(shè)備。如果附近房間有,也需留意。
3、大型制冷設(shè)備:
(1)危害: 如-80°C超低溫冰箱、大型4°C冷藏柜的壓縮機(jī)在啟動(dòng)和運(yùn)行時(shí)會(huì)產(chǎn)生電磁干擾和振動(dòng)。
(2)建議: 盡量不要將qPCR儀緊靠著這些冰箱放置。保持一定距離。
4、渦旋振蕩器、磁力攪拌器:
(1)危害: 雖然功率小,但電機(jī)工作也會(huì)產(chǎn)生高頻率的電磁干擾。
(2)建議: 不要在qPCR儀正在運(yùn)行時(shí),在其旁邊使用這些設(shè)備。加樣準(zhǔn)備階段可以,但運(yùn)行時(shí)關(guān)閉或移開(kāi)。
5、其他大型電機(jī)設(shè)備:
危害: 如真空泵、搖床、大型水浴鍋等。
二、伯樂(lè)CFX DUET實(shí)時(shí)熒光定量PCR產(chǎn)生強(qiáng)烈振動(dòng)的儀器
振動(dòng)會(huì)影響qPCR儀內(nèi)部光學(xué)元件的精準(zhǔn)對(duì)位,可能導(dǎo)致熒光信號(hào)采集不準(zhǔn),影響Ct值的重復(fù)性。
1、離心機(jī)(再次強(qiáng)調(diào)): 離心機(jī),特別是轉(zhuǎn)子不平衡時(shí),會(huì)產(chǎn)生巨大振動(dòng)。
2、搖床/振蕩培養(yǎng)箱: 運(yùn)行時(shí)是持續(xù)的振動(dòng)源。
3、真空泵: 工作時(shí)振動(dòng)非常明顯。
4、大型空調(diào)或通風(fēng)系統(tǒng)的外機(jī): 如果安裝在附近,其振動(dòng)會(huì)通過(guò)實(shí)驗(yàn)臺(tái)面?zhèn)鬟f。
5、建議: 將qPCR儀放置在堅(jiān)固、平穩(wěn)、獨(dú)立的實(shí)驗(yàn)臺(tái)面上,遠(yuǎn)離這些振動(dòng)源。必要時(shí)可以使用防震臺(tái)。
三、伯樂(lè)CFX DUET實(shí)時(shí)熒光定量PCR產(chǎn)生氣溶膠污染的儀器
這是從樣本純度和實(shí)驗(yàn)交叉污染角度考慮。
1、高速離心機(jī):
危害: 在打開(kāi)離心管蓋的瞬間,極易產(chǎn)生氣溶膠,如果其中含有DNA/RNA模板或PCR產(chǎn)物,會(huì)污染您的qPCR反應(yīng)體系,導(dǎo)致假陽(yáng)性。
建議: 樣本制備區(qū)(尤其是核酸提取和加樣區(qū))必須與qPCR擴(kuò)增/檢測(cè)區(qū)在空間上分開(kāi)。 qPCR儀應(yīng)該放置在干凈的“擴(kuò)增區(qū)"或“檢測(cè)區(qū)",這個(gè)區(qū)域內(nèi)不應(yīng)該進(jìn)行任何形式的樣本開(kāi)蓋、核酸提取等操作。
2、渦旋振蕩器:
危害: 劇烈渦旋混合開(kāi)蓋或管蓋不緊的樣本管時(shí),會(huì)產(chǎn)生氣溶膠。
建議: 所有可能產(chǎn)生氣溶膠的操作都應(yīng)在樣本準(zhǔn)備區(qū)進(jìn)行,切勿在qPCR儀旁邊進(jìn)行。
四、總結(jié)與實(shí)踐建議
1、分區(qū)操作是金標(biāo)準(zhǔn): 嚴(yán)格遵守實(shí)時(shí)熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)室的“四區(qū)原則"(試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本制備區(qū)、擴(kuò)增區(qū)、產(chǎn)物分析區(qū))。CFX DUET必須放置在擴(kuò)增區(qū)。這個(gè)區(qū)域應(yīng)該是“干凈"的,只放置qPCR儀和電腦,不進(jìn)行任何樣本處理。
2、電源: 為CFX DUET配備一個(gè)專(zhuān)用的墻壁插座或一個(gè)干凈的、不帶任何其他大功率設(shè)備的電源排插。
3、穩(wěn)定的實(shí)驗(yàn)臺(tái)面: 將儀器放在平穩(wěn)、無(wú)振動(dòng)的位置。
4、良好的散熱環(huán)境: 周?chē)A(yù)留空間,遠(yuǎn)離熱源,保持通風(fēng)。
5、保持清潔: 定期清潔樣品槽和外殼,防止灰塵和污染物影響。
簡(jiǎn)單來(lái)說(shuō),請(qǐng)將您的伯樂(lè)CFX DUET想象成一位正在聽(tīng)微弱心跳聲的醫(yī)生。您需要為他創(chuàng)造一個(gè)安靜(無(wú)電磁干擾)、穩(wěn)定(無(wú)振動(dòng))、干凈(無(wú)污染)且涼爽(散熱良好)的環(huán)境,他才能做出最準(zhǔn)確的診斷。