伯樂(lè)CFX DUET是一款性能穩(wěn)定、應(yīng)用廣泛的實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀。要完成一個(gè)完整的qPCR實(shí)驗(yàn)，您需要準(zhǔn)備以下三大類(lèi)物品：

一、伯樂(lè)CFX DUET實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀核心試劑

這部分是進(jìn)行PCR擴(kuò)增和熒光信號(hào)檢測(cè)所必需的生化試劑。

1、qPCR預(yù)混液

這是最關(guān)鍵的試劑，通常是一個(gè)包含熱啟動(dòng)Taq DNA聚合酶、dNTPs、MgCl? 和優(yōu)化緩沖液的即用型主混合物。

伯樂(lè)自有品牌：Bio-Rad的SsoAdvanced Universal SYBR Green Supermix 是常用的選擇之一，它對(duì)SYBR Green染料進(jìn)行了專(zhuān)門(mén)優(yōu)化，具有高效率和特異性。

其他兼容品牌：只要是為qPCR設(shè)計(jì)的預(yù)混液，并且熒光染料與儀器光學(xué)檢測(cè)系統(tǒng)兼容（如SYBR Green, FAM, HEX, TAMRA, ROX, Cy5等），都可以使用。例如，TAKARA、Thermo Fisher等公司的同類(lèi)產(chǎn)品也廣泛使用。

2、熒光檢測(cè)試劑

染料法：如果您使用SYBR Green 方法，熒光染料通常已經(jīng)包含在上述的預(yù)混液中。

探針?lè)ǎ喝绻褂肨aqMan 或其它水解探針?lè)?，您需要額外購(gòu)買(mǎi)和添加設(shè)計(jì)好的特異性熒光探針。

3、模板DNA/cDNA

您要檢測(cè)的樣品核酸，如從樣本中提取的基因組DNA或由RNA反轉(zhuǎn)錄得到的cDNA。

4、引物

針對(duì)您目標(biāo)基因特異性設(shè)計(jì)的上游和下游引物。

5、無(wú)核酸酶水

用于稀釋和調(diào)整反應(yīng)體系體積。

二、伯樂(lè)CFX DUET實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀核心耗材

這部分是盛放反應(yīng)液并進(jìn)行實(shí)驗(yàn)的物理載體。

1、qPCR反應(yīng)板/八聯(lián)管

96孔板：這是最標(biāo)準(zhǔn)和常用的耗材。CFX DUET適配標(biāo)準(zhǔn)的96孔PCR板。

材質(zhì)：通常為聚丙烯，光學(xué)透明或帶有透明光學(xué)膜蓋。

顏色：常見(jiàn)的是白色，因?yàn)榘咨芊瓷錈晒猓瑴p少孔間串?dāng)_，提高信噪比。透明板也可使用，但在信號(hào)較弱時(shí)可能不如白色板。

八聯(lián)管及管架：如果您處理的樣本量少，使用八聯(lián)管更加靈活經(jīng)濟(jì)。您需要相應(yīng)數(shù)量的單個(gè)管蓋或透明光學(xué)封板膜來(lái)密封。

2、光學(xué)封板膜

必需的耗材！用于密封96孔板或八聯(lián)管。

要求：必須是光學(xué)級(jí)的透明密封膜，以保證透光性，并且能牢固粘附，防止實(shí)驗(yàn)過(guò)程中液體蒸發(fā)和產(chǎn)生冷凝水。不能使用普通的封口膜。

三、總結(jié)清單

1、2x qPCR PreMix

體積：10 µL

備注：例如 SsoAdvanced SYBR Green Supermix

2、正向引物

體積：0.5-1 µL

備注：根據(jù)預(yù)混液說(shuō)明確定終濃度

3、反向引物

體積：0.5-1 µL

備注：根據(jù)預(yù)混液說(shuō)明確定終濃度

4、模板DNA

體積：1-5 µL

備注：體積取決于濃度，通常建議在100pg-100ng之間

5、無(wú)核酸酶水

體積：補(bǔ)足至 20 µL

備注：計(jì)算并加入，使總體積為20µL

6、耗材：

96孔qPCR板 或 八聯(lián)管 + 管架

光學(xué)透明封板膜

無(wú)菌、無(wú)核酸酶帶濾芯吸頭（不同量程）