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PCR儀，細(xì)胞計(jì)數(shù)儀，熒光計(jì)，紫外分光光度計(jì)，離心機(jī)，電泳儀電泳槽，化學(xué)發(fā)光凝膠成像系統(tǒng)，移液器，顯微鏡，醫(yī)用藥品冷藏箱
產(chǎn)品分類PRODUCT CLASSIFICATION
推薦產(chǎn)品Recommended products
伯樂(lè)（Bio-Rad）的T100是一款非常經(jīng)典和可靠的梯度PCR儀，其熱蓋設(shè)計(jì)使得它能夠兼容多種類型的PCR管和板，因此在染料的選擇上非常靈活?？偟膩?lái)說(shuō)，用于T100 PCR儀的染料可以分為兩大類：
一、伯樂(lè)T100PCR儀實(shí)時(shí)熒光定量PCR染料
這類染料在反應(yīng)過(guò)程中與DNA結(jié)合并發(fā)出熒光，通過(guò)儀器實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)熒光信號(hào)來(lái)對(duì)DNA進(jìn)行定量。T100本身是普通PCR儀，不能做qPCR。但如果您是為后續(xù)在qPCR儀上進(jìn)行檢測(cè)而準(zhǔn)備樣品，那么您會(huì)在T100上進(jìn)行qPCR反應(yīng)的“擴(kuò)增"步驟。常用的染料/探針包括：
1、SYBR Green I
原理：一種常用的DNA結(jié)合染料，可嵌入DNA雙鏈的小溝中，結(jié)合后熒光信號(hào)大大增強(qiáng)。
優(yōu)點(diǎn)：成本低，使用方便，無(wú)需設(shè)計(jì)探針，適用于多種實(shí)驗(yàn)。
缺點(diǎn)：特異性稍差，會(huì)與任何雙鏈DNA（包括引物二聚體）結(jié)合，可能導(dǎo)致假陽(yáng)性。需要通過(guò)熔解曲線分析來(lái)確認(rèn)產(chǎn)物的特異性。
2、TaqMan 探針
原理：一種序列特異性的寡核苷酸探針，兩端分別標(biāo)記有報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅基團(tuán)。當(dāng)PCR擴(kuò)增發(fā)生時(shí)，Taq酶的5‘→3’外切酶活性會(huì)降解探針，使報(bào)告基團(tuán)與淬滅基團(tuán)分離，從而發(fā)出熒光。
優(yōu)點(diǎn)：特異性高，因?yàn)橹挥心康钠伪粩U(kuò)增時(shí)才會(huì)產(chǎn)生熒光信號(hào)。
缺點(diǎn)：需要針對(duì)每個(gè)靶序列設(shè)計(jì)并合成特異的探針，成本較高。
3、EvaGreen
原理：與SYBR Green I類似，也是一種結(jié)合雙鏈DNA的染料。
優(yōu)點(diǎn)：熒光信號(hào)更強(qiáng)，穩(wěn)定性更好，對(duì)PCR的抑制性比SYBR Green I小，尤其適合高分辨率熔解曲線分析。
缺點(diǎn)：成本通常比SYBR Green I略高。
二、伯樂(lè)T100PCR儀終點(diǎn)法PCR檢測(cè)染料
這類染料用于在PCR反應(yīng)結(jié)束后，通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳來(lái)檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物。您需要將染料與PCR產(chǎn)物混合，然后上樣跑膠。
1、GelRed / GelGreen
優(yōu)點(diǎn)：是目前安全、敏感的核酸凝膠染料之一，其誘變毒性遠(yuǎn)低于傳統(tǒng)的EB（溴化乙錠）。熒光信號(hào)強(qiáng)，背景低。
使用方式：可以添加到熔化的瓊脂糖凝膠中，或者在電泳前與PCR產(chǎn)物直接混合。
2、SYBR Safe
優(yōu)點(diǎn)：由賽默飛公司推出，被宣傳為一種安全的EB替代品。在藍(lán)光或紫外光下均可激發(fā)。
使用方式：同GelRed。
3、溴化乙錠
注意：EB是一種強(qiáng)誘變劑，有潛在的健康風(fēng)險(xiǎn)，目前不推薦使用。盡管它非常便宜且檢測(cè)效果穩(wěn)定，但出于安全考慮，實(shí)驗(yàn)室已普遍用上述 safer dyes 替代。
4、常規(guī)DNA上樣緩沖液
通常含有溴酚藍(lán)和/或二甲苯青作為指示劑，以及甘油來(lái)增加樣品密度。它們本身不是DNA染料，但必須與上述DNA染料配合使用，以便于上樣和監(jiān)控電泳進(jìn)程。
三、實(shí)用建議：
1、如果您做的是普通PCR，跑膠看結(jié)果：請(qǐng)選擇 GelRed 或 GelGreen。它們安全、效果好，是現(xiàn)在的黃金標(biāo)準(zhǔn)。
2、如果您是為qPCR準(zhǔn)備樣品：請(qǐng)根據(jù)您的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)、預(yù)算和對(duì)特異性的要求，在預(yù)混液中選擇 SYBR Green 或 TaqMan Probe 體系。伯樂(lè)T100可以地運(yùn)行這些qPCR預(yù)混液中的擴(kuò)增程序。
重要提示：無(wú)論使用哪種染料，請(qǐng)務(wù)必遵循您所購(gòu)買的預(yù)混液或染料說(shuō)明書(shū)上的推薦PCR程序和建議的染料濃度。
