QuantStudio 3 是一款緊湊、經(jīng)濟的96孔板qPCR儀，非常適合常規(guī)的基因表達分析、病原體檢測和基因分型等應(yīng)用。其特點是操作簡便，軟件直觀。

一、賽默飛QuantStudio3實時熒光定量PCR主要技術(shù)參數(shù)

尺寸(長寬高) 27 cm x 50 cm x 40 cm

重量 35 kg

溫度范圍 4-100°C

運行時間 ＜30min

通道 4個熒光通道

樣本體積 10-100 μL

變溫速率(模塊、樣本) 6.5°C/秒 3.66°C/秒

容量 1 x 96孔-0.1 ml

顯示器 8英寸彩色 TFT LCD 觸摸屏

激發(fā)檢測范圍 500-640 nm

產(chǎn)地 美國

關(guān)鍵參數(shù)解讀：

1、4通道：意味著一次運行最多可以同時檢測4個不同的靶基因（使用不同熒光染料標(biāo)記的探針）或者進行多色熔解曲線分析。

2、LED光源與CCD檢測：這種設(shè)計使其光學(xué)系統(tǒng)非常穩(wěn)定耐用，無需像鹵鎢燈那樣定期更換。

3、快速的升降溫速率：可以顯著縮短PCR循環(huán)時間，提高實驗效率。

二、賽默飛QuantStudio3實時熒光定量PCR使用說明書

1、創(chuàng)建新實驗

在軟件主界面點擊 "New Experiment" (新建實驗)。

2、選擇實驗類型：

（1）Standard Curve (Absolute Quantification)：定量，用于計算樣品中模板拷貝數(shù)。

（2）Comparative ΔΔCt (Quantitation)：相對定量，用于分析基因的相對表達水平。

（3）Melt Curve：熔解曲線，用于鑒定PCR產(chǎn)物的特異性或進行基因分型。

（4）Genotyping：基因分型，專門用于等位基因判別。

3、設(shè)置實驗板：

（1）軟件會顯示一個虛擬的96孔板界面。

（2）用鼠標(biāo)選中孔位，在右側(cè)面板為其分配 "Sample Type" (樣品類型)，如 Unknown, Standard, NTC等。

（3）為每個孔分配 "Target" (檢測目標(biāo))，例如 Gene A, Gene B, 內(nèi)參基因等。你需要先創(chuàng)建這些目標(biāo)。

（4）為每個"Target"選擇對應(yīng)的 "Dye" (熒光染料)，如 FAM, VIC, ROX, CY5 等。

三、程序設(shè)置

點擊 "Protocol" 選項卡，設(shè)置PCR循環(huán)程序。一個典型的qPCR程序包括：

1、階段1：UNG酶孵育 (可選，防污染)

溫度：50°C

時間：2分鐘

2、階段2：預(yù)變性 (Hot Start)

溫度：95°C

時間：2-10分鐘 (根據(jù)酶的要求)

3、階段3：PCR循環(huán) (40-45個循環(huán))

變性：95°C， 15秒

退火/延伸：60°C， 1分鐘 (此步驟需根據(jù)引物Tm值優(yōu)化)

在此步驟末采集熒光信號 (對于SYBR Green等染料法)。

4、階段4：熔解曲線分析 (可選，用于SYBR Green實驗)

95°C， 15秒

60°C， 1分鐘

從60°C緩慢升溫到95°C (例如，0.05°C/秒)，并持續(xù)采集熒光信號。

四、重要注意事項與維護

1、光學(xué)校準(zhǔn)：建議定期（如每季度或更換實驗場所后）運行光學(xué)校準(zhǔn)程序，以確保所有熒光通道的檢測準(zhǔn)確性。

2、背景熒光校準(zhǔn)：在創(chuàng)建實驗時，可以選擇運行"Background Calibration"（背景校準(zhǔn)），以消除板子和試劑的本底熒光。

3、ROX參比染料：根據(jù)你所使用的qPCR預(yù)混試劑類型，在設(shè)置"Dye"時，需要正確選擇是否需要ROX染料作為內(nèi)參，以及其濃度級別（如 Passive Reference ROX, ROX Low, ROX High）。

4、清潔維護：定期用柔軟的干布清潔儀器表面和樣品槽。如果發(fā)生污染，可用70%乙醇輕微濕潤的無絨布擦拭。

5、數(shù)據(jù)備份：定期備份實驗數(shù)據(jù)。