賽默飛StepOne實時熒光定量PCR系統(tǒng)的日常維護(hù)保養(yǎng)，這里為您整理了一份詳細(xì)、可操作的指南。遵循這些步驟可以顯著提高實驗的重復(fù)性、延長儀器壽命并減少故障。維護(hù)保養(yǎng)可以分為 “日常常規(guī)維護(hù)"、“周期性維護(hù)"和“特殊狀況處理" 三部分。

一、賽默飛StepOne實時熒光定量PCR日常常規(guī)維護(hù)

這是最基本也是最重要的部分，主要針對可能產(chǎn)生污染和影響儀器性能的環(huán)節(jié)。

1、實驗前：

（1）儀器外部清潔：用柔軟的濕布（可蘸取少量溫和的清潔劑或75%乙醇）擦拭儀器外殼、屏幕和鍵盤，去除灰塵和潛在污染物。注意：不要讓任何液體流入儀器內(nèi)部。

（2）檢查熱蓋：確保熱蓋清潔、無殘留物（如封口膜碎屑、油污等）。如果有污染，用無塵棉簽蘸取75%乙醇或去離子水輕輕擦拭。

（3）準(zhǔn)備耗材：

使用高質(zhì)量、無RNase/DNase的PCR管/板。

確保反應(yīng)板或八聯(lián)管底部潔凈、無指紋，以免影響熒光讀取。

正確使用光學(xué)封膜，確保密封平整，無褶皺，防止蒸發(fā)和污染。

2、實驗后：

（1）反應(yīng)塊清潔：

這是核心步驟！ 運行完程序，待反應(yīng)塊溫度降至室溫或以下后，打開反應(yīng)塊。

使用無塵棉簽或壓縮空氣，仔細(xì)清除反應(yīng)塊樣品槽內(nèi)可能殘留的灰塵、冷凝水或極少數(shù)液體濺出物。

如果發(fā)現(xiàn)有液體濺溢，必須立即清潔：

（2）立即用無塵棉簽吸干液體。

（3）再用棉簽蘸取75%乙醇擦拭污染區(qū)域。

（4）最后用干棉簽擦干，并讓乙醇揮發(fā)后再運行下一個程序。

（5）熱蓋清潔：同實驗前檢查，如有必要，進(jìn)行清潔。

（6）臺面清潔：實驗結(jié)束后，清理儀器周圍臺面，保持整潔。

二、周期性維護(hù)

這部分維護(hù)旨在確保光學(xué)系統(tǒng)和溫控系統(tǒng)的長期穩(wěn)定性。

1、光學(xué)系統(tǒng)校準(zhǔn)與驗證

（1）光譜校準(zhǔn)：建議每3-6個月進(jìn)行一次，或者在更換了不同品牌的耗材/染料、移動儀器后、或發(fā)現(xiàn)信號基線異常時進(jìn)行。

操作：在電腦軟件界面中，選擇“Tools" -> “Calibration" -> “Spectral Calibration"。按照屏幕提示，放入空的、潔凈的適配板，運行校準(zhǔn)程序。校準(zhǔn)時務(wù)必關(guān)閉實驗室燈光，避免光線干擾。

（2）熒光校準(zhǔn)：使用ROX參考染料時，系統(tǒng)通常會自動進(jìn)行。如果實驗方案要求精確的ROX校正，可定期運行廠家提供的校準(zhǔn)板進(jìn)行驗證。

2、背景信號檢測

定期運行一個空反應(yīng)（只加水或緩沖液）的程序，檢測各通道的背景熒光值。這有助于判斷反應(yīng)塊或光學(xué)組件是否存在污染或性能衰減。

3、運行性能驗證

使用已知濃度和擴增效率的DNA樣本（如賽默飛提供的性能驗證試劑盒），定期運行qPCR實驗，檢查Ct值的重復(fù)性、標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率和R2值，確保儀器整體性能達(dá)標(biāo)。

4、深度清潔

對反應(yīng)塊、熱蓋和儀器內(nèi)部不易觸及的區(qū)域進(jìn)行清潔。在進(jìn)行深度清潔前，請務(wù)必關(guān)閉儀器電源并拔掉電源線。

三、特殊狀況處理

1、污染處理：

核酸污染：如果懷疑由氣溶膠導(dǎo)致的PCR污染，需要對實驗室環(huán)境和工作臺進(jìn)行去污染處理（如使用DNA/RNA清除劑）。同時，對儀器反應(yīng)塊和熱蓋用DNA/RNA清除劑擦拭，然后用75%乙醇擦拭以去除殘留。

熒光染料污染：如果發(fā)生染料泄漏，立即用棉簽和75%乙醇清潔，防止染料干涸后難以清除并影響熒光檢測。

2、軟件與數(shù)據(jù)備份：

定期更新儀器固件和軟件至新版本，以獲取性能優(yōu)化和漏洞修復(fù)。

定期備份實驗數(shù)據(jù)和儀器設(shè)置，防止數(shù)據(jù)丟失。