PCR儀（聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)儀，Polymerase Chain Reaction Machine）的工作原理基于DNA復(fù)制的自然過(guò)程，通過(guò)模擬DNA復(fù)制的關(guān)鍵步驟，在體外快速擴(kuò)增特定的DNA片段。以下是PCR儀工作原理的詳細(xì)解釋?zhuān)?/span>

一、基本步驟原理

1、變性：

將反應(yīng)體系加熱到 90℃-95℃左右，此時(shí)雙鏈 DNA 分子的氫鍵斷裂，兩條互補(bǔ)鏈解開(kāi)成為單鏈 DNA，便于后續(xù)以單鏈為模板進(jìn)行新鏈合成。例如，常見(jiàn)的基因組 DNA 經(jīng)過(guò)這一高溫處理后，原本的雙鏈結(jié)構(gòu)會(huì)被打開(kāi)，形成單鏈狀態(tài)。

2、退火：

溫度降低至 50℃-65℃左右，根據(jù)引物（人工合成的短鏈 DNA 片段，能與目標(biāo) DNA 序列兩端特異性結(jié)合）的堿基組成和長(zhǎng)度等因素確定具體溫度。在這個(gè)溫度下，引物可以按照堿基互補(bǔ)配對(duì)原則，結(jié)合到單鏈 DNA 模板上與之互補(bǔ)的特定區(qū)域，為后續(xù) DNA 新鏈的合成確定起始位置。

3、延伸：

溫度升高到 70℃-75℃左右，這個(gè)溫度是 DNA 聚合酶的最適作用溫度，在 DNA 聚合酶（常用的如 Taq DNA 聚合酶等，它具有熱穩(wěn)定性，能耐受高溫變性步驟的反復(fù)加熱）的催化作用下，以單鏈 DNA 為模板，以 dNTP（脫氧核苷三磷酸，是合成 DNA 的原料）為底物，按照堿基互補(bǔ)配對(duì)原則，從引物的 3’端開(kāi)始逐個(gè)添加脫氧核苷酸，合成與模板鏈互補(bǔ)的新 DNA 鏈。

二、循環(huán)擴(kuò)增

經(jīng)過(guò)變性、退火、延伸這一循環(huán)后，DNA 的量實(shí)現(xiàn)了一定程度的增加，一條雙鏈 DNA 經(jīng)過(guò)一輪循環(huán)后變成了兩條雙鏈 DNA。然后不斷重復(fù)上述三個(gè)步驟，每循環(huán)一次，DNA 的數(shù)量就會(huì)以指數(shù)形式增長(zhǎng)，經(jīng)過(guò)幾十次循環(huán)后，就可以獲得大量的目標(biāo) DNA 片段，便于后續(xù)進(jìn)行檢測(cè)、分析等操作。、

總之，PCR 儀通過(guò)精確控制溫度變化，按照設(shè)定好的程序讓反應(yīng)體系反復(fù)經(jīng)歷變性、退火、延伸的循環(huán)過(guò)程，實(shí)現(xiàn)對(duì)特定 DNA 片段的體外大量擴(kuò)增。